猪细小病毒(PPV)检测试剂盒酶联法
本试剂盒仅供研究使用。 96T
使 用 目 的 ：
本试剂盒用于测定血清，血浆及相关液体中细小病毒（PPV）表达。
实 验 原 理 ：
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中猪细小病毒（PPV） 。用纯
化的猪细小病毒（PPV）抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中细小病毒（PPV）抗
原相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与 HRP 标记的细小病毒（PPV）抗体
结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP
酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测
定吸光度（OD 值） ，与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中猪细小病毒（PPV）的存在与
否。
猪细小病毒(PPV)检测试剂盒酶联法试 剂 盒 组 成 ：
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1/瓶 8 阳性对照 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 阴性对照 0.5ml×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张
6 显色剂 B 液 6ml×1 瓶 12 密封袋 1 个
猪细小病毒(PPV)检测试剂盒酶联法标 本 要 求 ：
1．标本处理：血清、血浆标本可直接检测
2．标本按要求制备后尽早进行实验。如不能及时检测，可将标本在-20℃保存一个月，
但应避免反复冻融。
3．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
猪细小病毒(PPV)检测试剂盒酶联法操 作 步 骤 ：
1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1
孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照（标准品）50µl。然后在待测
样品孔先加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl。加样将样品加于酶标板孔底部，
尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A 50µl，再加入显色剂 B 50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟
10. 终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。
猪细小病毒(PPV)检测试剂盒酶联法结 果 判 定 ：
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.15
临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
阴性判定：样品 OD 值< 临界值（CUT OFF）者为细小病毒（PPV）阴性
阳性判定：样品 OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为细小病毒（PPV）阳性
注 意 事 项
1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物请避光保存。
6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm
7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须
注意安全。
保 存 条 件 及 有 效 期
1．试剂盒保存： ；2-8℃。
2．有效期：6 个月