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气相色谱内标法测定植物油中角鲨烯含量

武汉泰特沃斯科技有限公司，是国内*的气相色谱仪供应商。GC2030系列气相色谱仪是武汉泰特沃斯科技有限公司潜心研究研发出来的气相色谱仪。以下由武汉泰特沃斯科技有限公司色谱技术人员主要介绍用气相色谱内标法测定植物油中角鲨烯含量。

角鲨烯是一种高不饱和的天然萜类化合物，属于脂质不皂化物，它初是从鲨鱼的肝油中发现的，1914年被命名为Squalene，其化学名为(6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-二十四碳六烯。它属于开链三萜，又称*萜，也称鲨烯，具有提高体内超氧化物歧化酶(SOD)活性、增强机体免疫能力、防癌、防心血管疾病、抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤等多种功能。因此，被广泛应用于医药和化妆品等相关领域。

目前，AOAC(Revised 1996)标准中有测定角鲨烯含量的方法，此方法通过不皂化物提取，柱色谱分离，后采用滴定方法对角鲨烯进行定量，检测过程较为繁琐，且后采用滴定法测量，误差较大。文献报道植物油中角鲨烯含量测定的方法较多，主要有高效液相色谱法、气相色谱法、气质联用法等。从采用的定量方式来看，利用高效液相色谱和气相色谱法多采用外标法定量，很少用到内标法，而气质联用法在定量方式主要采用内标法定量。从采用的前理处理方法来看，主要有溶剂稀释法、SPE柱法和皂化法。溶剂稀释法直接进样，不仅会污染色谱柱，缩短色谱柱使用寿命，而且杂质峰较多，影响与目标峰的分离；SPE柱法虽说能去除大部分油脂杂质，但是仍有部分杂质会残留，残留下来的杂质出峰时间较长，且使用SPE进行前处理油脂样品上样量小，对于角鲨烯含量较低的样品不适用，从目前的文献报道中看，也仅有角鲨烯含量较高的橄榄油用SPE进行前处理，该法前处理检测成本较高不适合推广使用；由于角鲨烯属于脂质不皂化物，因此本研究在文献基础上选择不皂物提取经典的方法——液液萃取法作为前处理方法。但不皂化物提取操作比较繁琐，难免会有所损失，而内标定量方法会减少操作上的误差，提高方法的准确性。因此，本研究通过内标种类和用量的选择，选出一种适用于气相色谱法定量角鲨烯的内标物质角鲨烷，建立一种以角鲨烷为内标测定植物油中的角鲨烯含量的气相色谱法，该法不仅分离效果好、灵敏度高、回收率高且成本低，适合植物油中角鲨烯含量测定方法推广使用。

标准品的配制

准确称取25 mg角鲨烯、25 mg角鲨烷标准品分别用正己烷定容于25 mL容量瓶，即配制成1 mg/mL角鲨烯标准储备液和1 mg/mL内标角鲨烷标准溶液。

色谱条件

气相色谱柱：HP-5毛细管柱，长30 m，内径0.32 mm，薄膜厚度0.25 μm；载气：高纯氮气(纯度99.999% )，恒压：16 psi，分流比1∶10；进样口温度：250 ℃；柱温采用程序升温方式，以15 ℃/min的速率从160 ℃升温到220℃，保持2 min，然后以5 ℃/min的速率升温到280 ℃，保持20 min；后以5 ℃/min的速率升温到300 ℃，保持2 min；FID检测器：温度300 ℃，氢气流速40 mL/min，空气流速450 mL/min，尾吹气流速30 mL/min；进样量：1.0 μL。

内标物质的选择

采用内标法定量时，内标物的选择是一项十分重要的工作。内标物选择的原则为内标物应当是试样中不存在的纯物质，这样内标物能准确加到样品中去；内标物应当和被分析的样品组分有基本相同或尽可能*的物理化学性质(如化学结构、极性、挥发度及在溶剂中的溶解度等)、色谱行为和响应特征，与被分析物质为同系物；同时，在色谱分析条件下，内标物必须能与样品中各组分充分分离。根据以上特点，本研究从二十四烷、角鲨烷、5α-胆甾烷、正三十二烷中筛选作为植物油中角鲨烯含量测定的内标，按1.2.3色谱条件进行分析，这几种内标出峰时间分别为二十四烷9.4 min，角鲨烷12.9 min，5α-胆甾烷 19.4 min，三十二烷 20.6 min。通过8种植物油(花生油、油茶籽油、葵花籽油、米糠油、芝麻油、玉米油、特级初榨橄榄油、大豆油)进行测定，只有角鲨烷能与样品中各组分*分离，且各植物油本底不含内标角鲨烷，同时，角鲨烷与角鲨烯结构相似，出峰位置较为接近且可*分离，满足方法学中对内标的要求，因此，选用角鲨烷作为角鲨烯气相色谱法测定的内标物质。

目前，利用液液萃取法提取植物油中角鲨烯的方法主要利用外标法定量，但是由于液液萃取前处理方法操作较为繁琐，难免会有所损失。本研究通过8种植物油(花生油、油茶籽油、葵花籽油、米糠油、芝麻油、玉米油、特级初榨橄榄油、大豆油)，4种内标物质(二十四烷、角鲨烷、5α-胆甾烷、正三十二烷)进行筛选，选出一种适合气相色谱法定量植物油中角鲨烯的内标物质角鲨烷，只有角鲨烷能与样品中各组分*分离，且各植物油本底不含内标角鲨烷，同时，对角鲨烷内标加入量进行选择，建立一种以角鲨烷为内标定量角鲨烯的气相色谱法，该方法加标回收率为95.5%～103.0%，精密度为1.42%～5.89%，检出限为0.05 mg/kg，由此可以看出，该方法不仅回收率高，重现性好，而且灵敏度高，该方法的建立不仅为植物油中角鲨烯的测定提供检测参考，同时为下一步科学评价植物油营养成分提供技术支撑。