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用途: 诺如(诺瓦克)病毒检测。
储存条件及有效期:试剂盒置于-20℃冰箱中冻存,试剂盒有效期为一年。
本试剂盒采用多重荧光PCR技术,针对诺如病毒1型(Norovirus G1,NV-1)和诺如病毒2型(Norovirus G2,NV-2)的基因序列,设计不同荧光信号标记的探针,通过荧光信号的变化检测样本中是否含有上述病毒的RNA。该试剂盒可用于多种样本(如人或动物粪便、食品、水产品等)诺如病毒的检测。
诺如病毒G1/G2分型双重荧光RT-PCR检测试剂盒操作流程:
1)从试剂盒中取出DEPC水、RT-PCR反应液、P溶液、阴性和阳性核酸对照,室温融化,酶混合液置冰箱4℃待用。
2)取待检样本(100μL)用Trizol法或柱法或磁珠法提取RNA,并溶解于50 μL DEPC水中。
3)配反应体系:试剂使用前,振荡混匀,3000rpm离心2秒。
在0.2mL平盖PCR薄壁管或平盖PCR八联管中,按上述体积加入反应体系液(阳性和阴性对照管同样配制,待检RNA溶液换为试剂盒提供的阳性核酸对照和阴性核酸对照,加样量分别为3μL),盖好管盖,去除管中气泡,并用离心机甩离,确保所有液体都在管底。将PCR 管放入荧光PCR检测仪中。
4)荧光PCR检测仪循环条件设定。
质控标准:
阴性对照的CT值应等于None;同时阳性对照的CT值应小于等于30。
否则,此次试验视为无效。(CT值应以S型曲线拐点的循环数为准)
结果判定:
1)CT值为None的样本判定为阴性;CT值小于等于38的样本判定为阳性。
2)CT值大于38的样本建议重做。重做后CT值为None判定为阴性,否则判定为阳性。
3)对于某些未呈现S型曲线,但本底较高的样本,应判定为阴性。