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大鼠TIMP-1检测试剂盒
产品名称 TIMP-1 (R) ELISA kit
特异性 系统和其它TIMP无交叉反应。
检测标本 大鼠血清、血浆、细胞培养上清
检测范围 31.2pg/ml→2000pg/ml
敏感性 <3pg/ml
保存条件 4℃六个月,-20℃一年。
大鼠TIMP-1检测试剂盒
背景资料 Tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs,基质金属蛋白酶抑制因子,调节基质金属蛋白酶的活化及蛋白活性。共有四个成员:TIMP-1,TIMP-2,TIMP-3,TIMP-4。TIMP-1可由多种细胞产生,通过非共价键结合抑制MMPs的活性。本试剂盒所用标准品为重组大鼠TIMP-1,从Cys24¬—ala217,194个氨基酸,分子量21.5KDa,由于糖化,分子量变为32-34KDa
大鼠TIMP-1检测试剂盒标准曲线可以绘成直线或是曲线(二次方程或三次方程)。通常是选取线性比较好的几个点绘成直线。直线斜率越高说明抗体的特异性及灵敏性好,R2值越靠近1,则说明线性关系好。曲线绘好后,有一些常用的参数,如抑制率、半数抑制、检测限、定量限、标准偏差、变异系数等等:
1.抑制率(%)=1-B/B0(B0为不含药物的OD值;B为含有药物的OD值)
2.标准差(SD)=[∑(Xi-B)2/(n-1)]1/2;
3.标准偏差(RSD)=SD/B
大鼠TIMP-1检测试剂盒半数抑制:指用药物(半抗原)去做竞争实验时呈现50%抑制效果时的药物浓度。药物浓度越低,而抑制率越高,则表示抗体对药物的特异性越好,灵敏度也高。
半数抑制浓度IC50对应的OD值:OD IC50=0.5 B0
检测下限(LOD)对应的OD值:ODLOD=B0-3SD;
定量限(LOQ)对应的OD值:ODLOQ=B0-10SD
间接ELISA操作中具体注意的问题
间接ELISA一般有6个步骤:大鼠TIMP-1检测试剂盒包被抗原、封闭、加一抗(在做竞争时同时加入药物)、加二抗、显色、终止。其中除了加显色和终止外,其余步骤之间都要进行洗板。在这里面,每一步都非常重要,假如有一步疏忽都会造成结果的不准确。通常ELISA结果会出现如空白显色、阴性偏高、方阵梯度不明显,还有如何提高间接竞争ELISA灵敏度等问题。