方法：
 

　　试剂
 

　　试剂甲：
 

　　A液：Na2CO3 10.00g
 

　　NaOH 2.00g
 

　　酒石酸钾钠(或钾盐钠盐) 0.25g
 

　　混合、溶于500ml蒸馏水中。
 

　　B液：CuSO4·5H2O 0.5g
 

　　H2O 100.00ml
 

　　用前将A液50份与B液1份混合即为试剂甲。
 

试剂乙：
 

　　于磨口回流瓶加入下列试剂
 

　　Na2WO4·2H2O 100.00g
 

　　NaMoO4·2H2O 25.00g
 

　　H2O 700.00ml
 

　　85%H3PO4 50.00ml
 

　　浓HCl 100.00ml
 

　　按上回流冷凝管以小火回流10h后再加：
 

　　硫酸锂 150.00g
 

　　H2O 50.00ml
 

　　溴水 数滴
 

　　开口继续沸腾15min，驱除过量的溴，冷却后溶液呈黄色微带绿色(如仍呈绿色，须重复滴加液体溴步骤)。稀释至1L，过滤，滤液置于棕色瓶保存。使用时用标准NaOH液滴定，以酚酞为指示剂，然后适当稀释(加水约1倍)使终浓度为1mol/L。
 

　　另外，如果money没有问题的话，可以直接买Sigma公司的Folin-酚试剂，有点贵。
 

　　标准曲线的制备
 

　　⑴ 取标准牛血清白蛋白2.50mg，溶于10ml蒸馏水中，使成250μg/ml。
 

　　⑵ 按表8-2稀释。
 

　　表8-2 标准曲线稀释方法
 

　　成分 试 管 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
 

　　牛血清白蛋白标准品(ml) 0 0.2 0.2 0.4 0.1 0.6 0.6 0.8 0.8 1.0 1.0
 

　　生li盐水(ml) 1.0 0.8 0.8 0.6 0.6 0.4 0.4 0.2 0.2 0 0
 

　　蛋白含量(μg/ml) 0 50 50 100 100 150 150 200 200 250 250
 

　　⑶ 每管加试剂甲5ml，混合后室温放置10min，再加0.50ml试剂乙(即Folin酚试剂)，立即摇匀(否则显色降低)。
 

　　⑷ 30min后测OD650nm。
 

　　⑸ 以OD为纵坐标，蛋白含量为横坐标，绘制标准曲线。
 

　　样品测定
 

　　⑴ 待测样品1ml(适当稀释至约含25μg-250μg/ml)。
 

　　⑵ 加试剂甲、乙。
 

　　⑶ 比色、测OD650值。
 

　　⑷ 查标准曲线，求蛋白含量乘以稀释倍数，即为样品的蛋白含量。