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土壤蔗糖酶检测试剂盒资料-齐一生物

时间:2017-09-18      阅读:331

土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase, S-SC)试剂盒说明书
For Research Use Only
仅供研究用
货号:QYS-235096
分光光度法 50 管/24 样

土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase, S-SC)试剂盒说明书测定意义:

S-SC 能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收,其酶促作用产物与土壤中有机质、氮、磷含量,微生物数量及土壤呼吸强度密切关,是评价土壤肥力的重要指标。
测定原理:

S-SC 催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与 3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在 510nm 有特征光吸收,在一定范围内 510nm 光吸收增加速率与 S-SC 活性成正比。
自备用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:甲苯 5mL×1 瓶,4℃保存;(自备)
试剂二:液体 15mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前每瓶加入 40mL 蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂4℃保存;
试剂四:液体 30mL×1 瓶,4℃保存。
土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase, S-SC)试剂盒说明书测定步骤和加样表:

试剂名称    测定管        对照管
                    
风干土样(g)    0.1            0.1
试剂一(μL)    15            15
振荡混匀,使土样全部湿润,37℃水浴 15min    
试剂二(μL)        250            250
试剂三(μL)        750            
蒸馏水(μL)                    750
                    

充分混匀,放入 37℃水浴培养 24 小时,10000 g,4℃,离心 5min,取上清液

上清液(μL)    200    200
试剂四(μL)    500    500

充分混匀,放入沸水浴中煮沸 5min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀,蒸馏水稀释 10 倍后(可以吸取 100μL,加入 900μL 蒸馏水稀释;如果吸光度大于 4,可以适当加大稀释倍数),510nm 处蒸馏水调零,读吸光值 A。计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。


S-SC 活性计算:

标准条件下测定的回归方程为 y = 4.9x -0.062;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。单位的定义:每天每 g 土样中产生 1mg 还原糖定义为一个 S-SC 活力单位。
S-SC 活力(U /g 土样)=( ΔA+0.062) ÷4.9×10×V 反总÷W÷T =20.7×(ΔA+0.062) 10:稀释倍数;T:反应时间,1d; V 反总:反应体系总体积:1.015mL;W:样本质量,

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