通过使用OlympusCKX53倒置显微镜拍摄的图像，奥林巴斯细胞融合度检查CKX-CCSW自动计算各种大小的培养容器中的细胞数量和融合百分比。
有*分析自体软骨细胞培养的细胞生长特征
–融合度检测软件在细胞处理中的应用–

背景
稳定的细胞培养过程和对细胞生长特性的有x分析对于自体软骨细胞植入和新的再s*物开发而言，是非常重要的两个因素。这两个因素均有与之相关的难题。实现稳定的培养过程需要用以预测细胞传代*佳时间的准确、可重复的细胞融合信息。细胞生长特性分析的挑战性在于用户希望在不必培养大量细胞的情况下获取准确的数据。奥林巴斯推出了CKX-CCSW软件可以改s细胞培养过程并帮助解决这些问题。
CKX-CCSW融合度检测器软件
该软件可与显微镜和数码相机结合使用对活细胞融合度进行测量。快速、简单的细胞计数程序以及高度准确且可重复的数据可以实现恒定条件下稳定且可预测的细胞培养。此外，无需破坏培养物即可测量培养物的数量和密度，从而将污染可能性降至*低。诸如倍增时间（DT）和群体倍增水平（PDL）等重要细胞生长数据可在不干扰细胞的情况下以*效且无损的方式获得。
CKX41显微镜、DP27数码相机和CKX-CCSW软件。

CKX-CCSW融合度检测软件的效果
1.解决稳定自体软骨细胞培养过程的难题
细胞传代的时间通常依靠视觉进行评估，而这可能导致人为错误和造成传代时间变化。CKX-CCSW软件可提供培养皿中生长细胞的准确融合信息，因此用户能够在合适的时间进行细胞传代。
2.解决有x获取细胞生长特征分析数据的难题
CKX-CCSW融合度检测软件能够提供准确、可重复的细胞生长数据，因此用户可以安排细胞传代时间，并减少培养过程中的库存。


准确性验证
为了评估CKX-CCSW软件的性能，可将软件计数的细胞数量与根据荧光染色图像计算的细胞数量进行比较。聚焦显微镜是获取准确生长曲线的重要因素，并且该软件的聚焦指示器可产生准确的结果。该软件的准确度估计为84–111％，表明该软件能够生成可靠的细胞生长曲线。

相衬图像
荧光染色的细胞核图像

在使用CKX-CCSW的情况下，即使细胞未染色，也可绘制与低密度到高密度细胞培养状态下进行荧光观察所获得计数准确度相当的生长曲线。
结论
CKX41显微镜、DP27数码显微镜相机和CKX-CCSW融合度检测器软件的结合让用户能够在尽可能减少人为错误的同时准确估计细胞传代的正确时间。该软件无需更改细胞培养环境工作流程即可轻松获取准确、可重复的细胞生长数据。
该项研究由日本医学研究与发展局（AMED）和经济产业省的“再s医学产业化基本评估技术开发”计划部分资助。样品制备和图像数据由OLYMPUS-RMS CORP提供。

诱导多能干（iPS）细胞，由于其潜在应用而继续处于再s医学和*物发现研究的*沿。针对研究目的维持、生长和准备iPS细胞的工作流程涉及许多过程。改进此类流程以提*效率和减轻细胞死亡对于推进所有干细胞相关研究均至关重要。干细胞研究虽然相对较新，但在很大程度上依赖于操作员的经验和技能，这意味着人为错误在集落功效中起着重要作用。指示iPS细胞融合度是优化集落，分化和获得可再现结果的有用工具。
iPS细胞研究示例


图1.iPS细胞集落的图像（左）和融合度测量结果（右）

在iPS细胞培养维持过程中使用奥林巴斯 CKX53组织培养显微镜获得多个图像，让CKX-CCSW软件能够提供准确的融合度数据。在六天时间内，分别在6孔板的不同位置拍摄三张、六张和十张图像。这些图像被导入到CKX-CCSW软件中，其中首先标出了细胞和背景（图1）。
从这里开始，在整个图像中以蓝色和绿色显示细胞和背景，并计算所有图像的融合度。在使用三张、六张和十张图像时，在第*天、第三天和第六天计算平均融合度和标准差。尽管所使用的图像数量发生了显著变化，但图2显示即使使用少量图像也可以生成准确的生长曲线。

图2.使用CKX-CCSW软件记录iPS细胞的集落变化、融合度

图3.iPS细胞集落融合的生长曲线（集落的3张图像）
所使用的设备和软件：奥林巴斯 CKX53显微镜，DP22相机，CKX-CCSW软件
物镜：PLN2X（NA 0.06，WD 5.8 mm）观察方法：明场
容器：6孔板
细胞：无滋y层的iPS细胞
由iPS PORTAL Inc.提供。
结论