成神经细胞瘤抑制瘤变蛋白1(NBL1)检测试剂盒操作步骤
时间:2020-01-06 阅读:130
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上海邦景实业有限公司 -
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130次成神经细胞瘤抑制瘤变蛋白1(NBL1)检测试剂盒操作步骤:
1. 取出试剂盒,室温(20-25℃)放置 30 分钟。
2. 分组:取出 96 孔板,根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准
品组(6 个浓度)、空白孔、待测样品组。
标准品的稀释:准备小试管6 只,依次编好号码,先在各小试管中加入标准品稀释液100ul,然后取原浓度标准品100ul 加入
一只已编好号的试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第二支试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第三只
试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第四只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第五只试管中,充分
混匀;然后在该试管中取100ul,弃掉。第六只试管作为0 号标准品。稀释后各管浓度分别是:
800ng/L,400ng/L,200ng/L,100ng/L,50ng/L ,0ng/L。
注:为减少实验误差,保证准确性,建议设置复孔。
3. 加样:依照标准品的顺序分别加入 50ul 的标准品溶液于空白微孔中;空白对照孔加入 50ul 的蒸馏水;其余微孔中先加样
品 40ul 然后再加*标记的抗 IFN-γ 抗体 10ul。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
4.温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。
6. 加酶标溶液:标准品组、待测样本组各孔中加入 50ul 的酶标溶液(空白对照孔除外)。
7. 温育:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于 37℃恒温孵育 1 小时。
8. 洗板:用稀释后的洗涤液注满每孔,静置 15-30s,充分清洗酶标板 5 次,用吸水纸*拍干。
9. 显色:各孔加入显色剂 A 液 50ul 后,再加入显色剂 B 液 50ul。
10. 终止:25-37℃下避光反应 10-15 分钟,加入 50ul 终止液。
11. 读板:在 450nm 波长读取各孔的 OD 值。
成神经细胞瘤抑制瘤变蛋白1(NBL1)检测试剂盒注:读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹,读板时间控制在终止反应后的 30 分钟内,以免影响准确性。