新型的四环素诱导表达系统
- 2011-03-10 13:04:351502
近日，Clontech宣布推出新型的四环素诱导表达系统，名为Tet-Expression Inducible Expression System。
与Tet-On/Tet-Off不同，Tet-Express是一种Tet-Off转录激活因子蛋白，它经过修饰和优化，能进行自我转导，也就是说，它能够通过蛋白转导通路自行穿过细胞膜进入细胞核。在没有四环素的情况下，Tet-Express结合PTRE3G启动子，并激活表达。省了一个表达四环素反式激活因子的载体，整个实验也就简单了很多。Tet-Express系统只需要单个载体和Tet-Express转导蛋白。诱导表达时，只需在细胞培养基中加入几微升Tet-Express，即可让所有细胞类型处于四环素控制的转录之下。
Tet-Express和Tet-On 3G系统中都包含了pTRE3G载体。此载体的可诱导启动子（PTRE3G）确保了极低的本底表达以及诱导后极高的表达。它在CMV启动子的上游包含了7个相同的tetO重复片段，也就是反式激活因子的结合位点，我们称之为四环素反应元件（TRE）。
基因表达的快速诱导很简单，目的基因克隆到TRE启动子之下。若需要表达目的蛋白，立即加入Tet-Express，基因表达会快速上升，两小时后达到大值的80%以上。若暂时不想表达目的蛋白，那就不加Tet-Express。Tet-Express的出现替代了表达反式激活因子的载体，也就无需对细胞系进行多轮的克隆筛选，这特别适合那些不能进行多轮筛选的细胞，它在多种细胞系中都很有效。