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新型的四环素诱导表达系统

2011-03-10 13:04:351493
来源:上海沪峰生物科技有限公司

       近日,Clontech宣布推出新型的四环素诱导表达系统,名为Tet-Expression Inducible Expression System。

        与Tet-On/Tet-Off不同,Tet-Express是一种Tet-Off转录激活因子蛋白,它经过修饰和优化,能进行自我转导,也就是说,它能够通过蛋白转导通路自行穿过细胞膜进入细胞核。在没有四环素的情况下,Tet-Express结合PTRE3G启动子,并激活表达。省了一个表达四环素反式激活因子的载体,整个实验也就简单了很多。Tet-Express系统只需要单个载体和Tet-Express转导蛋白。诱导表达时,只需在细胞培养基中加入几微升Tet-Express,即可让所有细胞类型处于四环素控制的转录之下。

        Tet-Express和Tet-On 3G系统中都包含了pTRE3G载体。此载体的可诱导启动子(PTRE3G)确保了极低的本底表达以及诱导后极高的表达。它在CMV启动子的上游包含了7个相同的tetO重复片段,也就是反式激活因子的结合位点,我们称之为四环素反应元件(TRE)。

        基因表达的快速诱导很简单,目的基因克隆到TRE启动子之下。若需要表达目的蛋白,立即加入Tet-Express,基因表达会快速上升,两小时后达到大值的80%以上。若暂时不想表达目的蛋白,那就不加Tet-Express。Tet-Express的出现替代了表达反式激活因子的载体,也就无需对细胞系进行多轮的克隆筛选,这特别适合那些不能进行多轮筛选的细胞,它在多种细胞系中都很有效。

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